生命經緯專題
  [前言] 顯微鏡是實驗室最常用的儀器之一。本專題在普通光學顯微鏡的基礎上,為您介紹熒光顯微鏡電子顯微鏡免疫電鏡的基本原理、種類及操作指南

  熒光顯微鏡也是光學顯微鏡的一種,主要的區別是二者的激發波長不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡結構和使用方法上的不同。

顯微鏡的基本光學原理

   透鏡組合和折射率。
   顯微鏡之所以能將被檢物體進行放大,是通過透鏡來實現的。單透鏡成象具有象差,嚴重影響成象質量。因此顯微鏡的主要光學部件都由透鏡組合而成。從透鏡的性能可知,只有凸透鏡才能起放大作用,而凹透鏡不行。顯微鏡的物鏡與目鏡雖都由透鏡組合而成,但相當于一個凸透鏡。[詳細]

顯微鏡的重要光學技術參數

   根據鏡檢的目的和實際情況來協調各參數的關系。
   顯微鏡的光學技術參數包括:數值孔徑、分辨率、放大率、焦深、視場寬度、覆蓋差、工作距離等等。這些參數并不都是越高越好,它們之間是相互聯系又相互制約的,在使用時,應根據鏡檢的目的和實際情況來協調參數間的關系,但應以保證分辨率為準。[詳細] 

顯微鏡的光學附件

   物鏡,目鏡,聚光鏡和照明裝置
   顯微鏡的光學部件包括物鏡,目鏡,聚光鏡及照明裝置幾個部分。各光學部件都直接決定和影響光學性能的優劣。本文為您詳細介紹各個光學附件的性質及顯微鏡光軸的調節方法。[詳細]

顯微鏡檢術分類
    正立式顯微鏡、偏光顯微鏡、 倒置顯微鏡和體視顯微鏡的鏡檢術
   在生物研究領域,透射式明場顯微鏡得到廣泛應用,在此基礎上各種特殊的鏡檢方法也得到應用,如相襯,熒光,干涉,暗場,這些鏡檢方法在 一些高檔顯微鏡上均能同時實現。[詳細]
熒光顯微鏡的結構和主要部件
    光源、濾色系統、反光鏡、聚光鏡、目鏡、物鏡和落射光裝置
   熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。是利用一定波長的光激發標本發射熒光,通過物鏡和目鏡系統放大以觀察標本的熒光圖像。[詳細]
熒光顯微鏡標本制作要求

  包括載玻片、蓋玻片和標本的厚度要求,封裱劑和鏡油的選擇。[詳細]

熒光顯微鏡基本操作

  1.關閉房間內的電燈,開啟顯微鏡汞燈;2.根據樣品標記的熒光素選擇相應的濾光片;3.放好樣品,找到合適的視野;4.如需拍照,請確認照相機內已裝好彩色膠卷;5.開啟自拍裝置,選擇手動檔,通常拍攝速度在0.5---10秒內;6.使用結束,關閉所有電源并做好使用記錄。[詳細]

熒光顯微鏡操作程序

  1. 開機  2.調試顯微鏡光路  3. 調試數碼相機拍攝照片  4. 關機  [詳細]

使用熒光顯微鏡的注意事項

  (1)嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作,不要隨意改變程序。(2)應在暗室中進行檢查。進入暗室后,接上電源,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發出強光穩定后,眼睛完全適應暗室,再開始觀察標本。(3)防止紫外線對眼睛的損害,在調整光源時應戴上防護眼鏡。……[詳細]

熒光圖像的記錄方法

  熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態學特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結果時,必須將二者結合起來綜合判斷……[詳細]

電子顯微鏡的原理

  電子顯微鏡是一種電子儀器設備,可用來詳細研究電子發射體表面電子的放射情形。電子顯微鏡有兩大類:(1)發射型。(2)電磁、靜電掃描型。前者用于研究電子放射現象;后者用以增加普通光學顯微鏡的應用范圍。[詳細]

透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)
   1932年Ruska發明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡,電子束的波長要比可見光和紫外光短得多,并且電子束的波長與發射電子束的電壓平方根成反比,也就是說電壓越高波長越短。目前TEM的分辨力可達0.2nm。[詳細]
掃描電子顯微鏡(Scanning Electron Microscope,SEM)

  掃描電子顯微鏡用來觀察標本的表面結構。其工作原理是用一束極細的電子束掃描樣品,在樣品表面激發出次級電子,次級電子由探測體收集,再經光電倍增管和放大器轉變為電信號來控制熒光屏上電子束的強度,顯示出與電子束同步的掃描圖像。圖像為立體形象,反映了標本的表面結構。[詳細]

掃描隧道顯微鏡(Scanning Tunneling Microscope,STM)
  掃描隧道顯微鏡由Binnig等1981年發明,根據量子力學原理中的隧道效應而設計。當原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時,此處電子云重疊,外加一電壓(2mV~2V),針尖與樣品之間產生隧道效應而有電子逸出,形成隧道電流。它的優點是三態(固態、液態和氣態)物質均可進行觀察。[詳細]
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免疫電鏡的原理及影響因素

   免疫電鏡技術是免疫化學技術與電鏡技術結合的產物,是在超微結構水平研究和觀察抗原、抗體結合定位的一種方法學。它分為兩大類:一類是免疫凝集電鏡技術,即采用抗原抗體凝集反應后,再經負染色直接在電鏡下觀察;另一類則是免疫電鏡定位技術。[詳細]

酶免疫電鏡技術

  酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度,借助于電子顯微鏡觀察,證明酶的存在,從而對抗原進行定位。 [詳細]

鐵蛋白免疫電鏡技術

  免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體,再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查,觀察到鐵蛋白抗體所在的位置,即抗原所在。[詳細]

非標記抗體免疫電鏡技術

   不標記抗體法可以避免一些不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。[詳細]

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