生命經緯專題

  聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction, PCR),是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的方法,也是分子生物學實驗最常用到的一種方法。根據適用對象的不同,又有熒光實時PCR、逆轉錄PCR等區別。本專題詳細介紹了PCR實驗的基本原理、步驟及常見問題的解決辦法。

  ·PCR引物設計的原則生命經緯 www.qajrar.icu
  PCR引物設計的目的是找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。對引物的設計不可能有一種包羅萬象的規則確保PCR的成功,但遵循某些原則,則有助于引物的設計。[詳細][到論壇參與討論]

  ·常用的PCR引物設計軟件:Primer Premier和Oligo生命經緯 www.qajrar.icu
    本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上,詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法,并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Premier Primer 5”軟件,而引物的評價分析則可采用“Oligo 6”軟件。[詳細][到論壇參與討論]

  ·背景知識:引物合成介紹及常見問題 生命經緯 www.qajrar.icu
  目前,引物的合成價格已經很便宜,其操作一般交由專業的公司完成。但你了解引物合成的原理嗎?你知道引物合成完成到最終使用還要經過哪些過程嗎?引物的合成會出錯嗎?了解這些,將對你的實驗大有裨益。[詳細][到論壇參與討論]

PCR的基礎知識  

  PCR實驗技術發展史 1985年,美國PE-Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等人發明了PCR,并于1993年獲得諾貝爾獎。[詳細]

  PCR實驗的基本原理 PCR是在試管中進行DNA復制反應。用加熱(變性)、冷卻(退火)、保溫(延伸)等改變溫度的辦法使DNA得以復制。[詳細]

  引物的稀釋和使用 介紹引物合成后,如何稀釋成自己需要的濃度以及引物如何保存。[詳細]  

    Real-time PCR與RT-PCR 這是兩種不同的PCR技術,前者用熒光的方法來定量模板濃度,后者用于RNA到cDNA轉錄及擴增。[詳細]

  ·PCR標準反應體系與反應條件生命經緯 www.qajrar.icu
  PCR反應五要素: 參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 反應體系的配制及反應條件的選擇是PCR式樣成功的關鍵。[詳細] [到論壇參與討論]

  ·PCR反應條件的選擇及優化生命經緯 www.qajrar.icu
  PCR技術已經在生物學研究和臨床醫學檢驗領域中得到了廣泛的應用,PCR技術也日臻完善。PCR技術操作簡便,特異性強,敏感度極高,正因為敏感度高,很容易受其他因素的影響,因此要得到準確可靠的反應結果,需根據不同的模板,摸索最適合的條件,配制出PCR反應試劑。[詳細] [到論壇參與討論]

  ·PCR反應的常見問題總結生命經緯 www.qajrar.icu
  在這篇文章中,作者在總結自己實驗的基礎上,詳細描述了PCR引物設計、PCR反應條件設定時遇到的問題及解決方法,并列舉了4種提高PCR反應特異性的方法。同時,作者也對產物測序的方式及PCR污染及對策做出了詳細的分析,推薦閱讀![詳細] [到論壇參與討論]

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  ·瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳
  PCR擴增反應完成之后,必須通過嚴格的鑒定,才能確定是否真正得到了準確可靠的預期特定擴增產物。凝膠電泳是檢測PCR產物常用和最簡便的方法,能判斷產物的大小,有助于產物的鑒定。凝膠電泳常用的有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳,前者主要用于DNA片段大于100bp者,后者主要用來檢測小片段DNA。 [詳細] [到論壇參與討論]

  ·PCR產物測序樣本的準備
  PCR產物電泳后,為了保證產物是真正的目的片段而非假陽性,必須割膠后進行測序。PCR技術與自動測序技術相結合后,它將成為一種最快、最有效的測定核苷酸序列的方法。本章主要綜述各種測模板的制備以及如何完成PCR產物的直接測序。[詳細] [到論壇參與討論]

  ·PCR產物克隆方法
  當PCR產物過少影響測序結果,或者需要大量的PCR產物用于后續實驗時,需要對實驗得到的PCR產物進行擴增(即克隆)。其通用的方法是把PCR擴增后的產物連接到相應的載體后,再轉移到相應的細菌菌株中擴增。本文介紹了不同情況下PCR產物與載體連接的一般原理及方法。[詳細] [到論壇參與討論]

 
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